荧光自动细胞计数仪应用场景简述

台盼蓝常用于检测细胞膜的完整性。一般活细胞的细胞膜结构完整且具有选择通透活性，可排斥台盼蓝染料。当细胞损伤或者死亡时，细胞膜不完整或其通透性会增加，因而台盼蓝可穿透变性的细胞膜进入到细胞内，将死细胞染成蓝色。在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，属于2B类致癌物，使用过程中，需要注意防护，切勿直接接触到皮肤或者黏膜。台盼蓝不仅对人体有毒害作用，对细胞也有一定的毒性。
由于台盼蓝为非特异性的细胞染料，仅通过膜完整性对样品进行筛选区分，没有一个客观的执行标准来观察细胞与一些如膜碎片的杂质或者台盼蓝中本身的杂质的区别，也容易产生系统误差。

2018年9月，美国药典出台了关于细胞冷冻保存的政策明确提出，对于冻存复苏的样本，类似于台盼蓝的染料来检测细胞完整性的方法用的越来越少，因为其不能很好的辨别冻存和复苏的细胞，这种检测方法经常需要特定细胞种类并且指定合适的浓度和时间。所以荧光染料越来越多的应用于复苏细胞的浓度活率检测。建议至少选用两种方法对复苏后的细胞进行活率检测。

相较于台盼蓝染色，AO/PI双
荧光染色计数法这种更精确的染色鉴定方法在细胞治疗等高要求行业广泛应用。常用于原代细胞如PBMCs等计数若配置红绿两种荧光，就可以使用AO/PI双染法进行细胞活率的计算，该染色法可解决台盼蓝只能通过胞膜完整性来判断的问题。
AO（Acridine Orange）又称为吖啶橙，PI（Propidium Iodide）又称为碘化丙锭，可分别将DNA染成绿色和红色，但是由于AO具有膜通透性而PI无膜通透性，所以活细胞会被染成绿色而死亡的细胞会呈红色，同时由于凋亡细胞中因染色质固缩或断裂为大小不等的片段形成了凋亡小体，AO或将凋亡小体染上致密浓染的黄绿色碎片颗粒，以此来精准地测定细胞活率。
由于AO/PI皆为核酸染料，所以相关杂质皆不会被染色。在生物医药领域研究中，原代细胞有着不可替代的地位，但是由于原代细胞分离自新鲜组织器官，在分散和消化时难免会将杂质混入细胞样品，所以在进行原代细胞分离时会经常使用AO/PI来计算监测细胞样品的活率和纯净度，以保证在计数时不会计入杂质。


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