细胞冻存
细胞冻存是指将细胞放在低温环境，以达到减少细胞代谢的作用，从而达到对细胞进行长期储存进行保种的目的，以供后续实验或临床使用。

细胞冻存流程示意图


目前，细胞冻存主要的技术为液氮冷冻法，实际冻存过程中，需要进行梯度温度冻存，并加入适量的保护剂以保证细胞内外的水分不会形成冰晶造成细胞的损伤或死亡。



什么时候可以冻存细胞

在准备对目标细胞进行冻存前，一定要确保细胞处在最佳的生长状态，可通过以下几个指标进行观测：
1）培养基的颜色和浑浊情况
培养基的颜色可以指示细胞是否生长过盛（比如偏黄就说明细胞长的太过）；而培养基出现浑浊情况往往是指示有污染存在，此时是不宜冻存的。
2）细胞培养的时间
通常情况下，新复苏的细胞建议在2周左右进行冻存，若连续培养超过二个月，性状大 概率会发生一些改变，此时的细胞也不适宜冻存。
3）细胞的数目
冻存时，每只冻存管内细胞最佳浓度为5x10^6个/ml—1x10^7个/ml，高密度或者低密度对细胞成活率都有一定的影响。细胞数目不足时，不建议冻存细胞。


细胞冻存前预处理
细胞被消化离心、去上清收集细胞沉淀后，往往需要用冻存液进行重悬并转移至冻存管。冻存液中一般含有渗透型的保护液如甘油或10%的二甲基亚砜（DMSO）和10%-90%胎牛血清。细胞内外主要成分都是水，若不加保护液直接冻存，细胞内外的水分会凝结成冰晶，引发细胞内源性的机械损伤。

细胞内水分凝结导致的细胞脱水，也会使得胞内pH值改变、蛋白变性
、细胞内器官功能的丧失乃至核内DNA损伤，最终极有可能导致细胞的死亡。

而冻存液往往都是易溶解的小分子物质，具有细胞渗透性，可以穿过细胞膜，进入细胞内，降低冰点，同时又可以提高细胞膜对水的通透性，使得细胞内水分渗出到细胞外，从而减少细胞内冰晶的形成。某些特殊细胞如原代皮肤细胞也会额外添加海藻糖等表面型保护剂，以提高细胞存活率。


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