技术干货 | MCAO造模方法及如何提高成功率

大鼠MCAO造模方法

(1) 麻醉成功后以仰卧位固定于手术台,常规备皮、消毒。将小鼠门齿利用缝合线钩住、固定，使得颈部被拉伸，方便接下来的手术操作。利用常规眼科剪或手术刀从颈部正中切开,从颈正中切口,利用镊子钝性分离颈部腺体组织、筋膜,暴露并分离颈总动脉( common carotid artery, CCA)、颈外动脉( external carotid artery, ECA)和颈内动脉( internal carotid artery, ICA)。

(2) 分离ICA及其颅外分支翼颚动脉,利用缝合线打活结，结扎翼颚动脉，或者直接利用血管夹夹闭翼鄂动脉，避免线栓插入翼鄂动脉，保持CCA的开放分支为ICA。

(3) 分离ECA主干,并利用电凝笔闭塞ECA的分支,结扎远心端并将其间断。在ECA残端用眼科剪剪开一“V”型小口,剪口之前用微动脉夹夹闭CCA和ICA，避免剪口处出现出血。将预处理过带硅胶头的线栓小心地从ECA插入。

(4) 去除ICA的微动脉夹后,插入尼龙线栓直至大脑中动脉的起始处,线栓插入17-18mm(见下图)。根据笔者的经验,线栓插入的长度应根据动物体重,如260~280g大鼠,插入深度约17mm,280g以上的大鼠,插入深度约18mm,总之,以遇到轻微的阻力为准,此时线栓正好进入颅内的大脑前动脉,阻塞大脑中动脉的开口。

 

(a) 在左颈外动脉远端做一切口,将线栓向颈总动脉方向插入,直至分叉口;

(b) 剪断颈外动脉后,将线栓以颈总外/颈内分又口为圆心逆时针旋转180°角,同时结扎翼膠动脉;

(c) 沿着颈内动脉方向进线,当达到15mm时要非常小心,缓慢进线,直至感觉到有轻微阻力为止。

 

(5) 若要恢复大脑中动脉的血流,只需把线栓拔出,使头端退到颈外动脉,颈总动脉的血流就可以再灌注到大脑中动脉。 (6) 结扎消毒后逐层缝合皮下组织和皮肤,等动物麻醉苏醒后放回笼中即可。 (7) 手术结束后应用激光散斑血流成像仪监测大脑皮层血流,当看到大脑皮层血液血流降低70%~80%,说明模型制备成功。
(8) 对照手术模型的制作步骤同前,但血管分离后不插入线栓,结扎消毒后缝合皮下组织及皮肤即可。

小鼠MCAO造模方法
小鼠MCAO模型的制作与大鼠的基本相同,可不结扎翼颚动脉,而是在进线栓时调整角度小心避开。其他不同之处在于,线栓为5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅胶),长度为15mm。根据动物体重的具体情况,线栓插入颈内动脉(10±0.5)mm即可,保证线栓正好进入颅内的大脑前动脉,阻塞大脑中动脉的开口。

如何提高MCAO造模成功率？

（1）挑选合适线栓，满足一下几点要求：

• 线栓不可过硬。过硬线栓容易找手感，但是容易出现刺破蛛网膜下腔血管，导致颅内出血。同时过硬线栓还会改变血管自然形态，当线栓插入血管以后，因为线栓过硬，血管肌张力无法使得线栓改变形态，只能被线栓改变形态，导致血管处于紧绷状态，对于再灌注操作不利。
• 选择硅胶头尽可能接近圆柱形的线栓，这样当线栓进入MCA外后，能够完全堵塞MCA，而不会出现缝隙，使得线栓可以立即阻塞MCA。

（2）采用散斑血流仪，实时观测颅脑血流情况。这样可以准确判断线栓是否阻塞MCA，一旦血流灌注量下降超过70%，即代表线栓阻塞MCA。

（3）MCAO线栓手术属于显微操作手术，不可控因素较多，需要多练习。一般常规连续练习3个月左右，即可实现造模；如果采用血流仪辅助造模，时间可以缩短至1个月，手术过程中可以实时调整线栓位置。另外现在发文越来越需要漂亮数据，瑞沃德的激光散斑血流仪RFLSI Ⅲ可提供高清漂亮血管血流分布图。