技术干货 | 新冠研究与类器官技术线上讲座答疑

答：1）观察细胞是否可以增殖和自我更新，在显微镜下观察是否有3D的细胞团块持续增长。

2）形态是否跟paper中发表的形态一致。

3）免疫荧光染色或者是流式细胞技术检查细胞的类型。

答：将新鲜的外科手术或者穿刺的样本切碎块，然后使用胶原蛋白酶消化，去除红细胞后，将细胞包裹在matrigel里面，加入特定类型的培养基，持续培养14天左右，隔天换液，观察细胞的长势。不同种类的肿瘤需要使用不同的培养基，可以查阅文献来获得培养基的配方。

答：类器官建立的初衷是模拟对应组织的生理功能，但是目前的类器官缺少ECM和免疫细胞，在某些研究领域中，比如肿瘤研究中存在缺陷。

答：3D Organoid 更能模拟对应器官的生理功能。比如肺的2D细胞系感染病毒同使用human airway organoid 感染病毒后病毒的replication kinetics 是不同的。3D organoid 得到的实验结果更加真实。同样的结论也可以在药物筛选中得到。

答：目前3D类器官缺少ECM和免疫细胞，在某些特定类型的研究中是存在缺陷的，所以引入ECM和免疫细胞可能是更接近组织真实性，但是目前的技术上面来讲，很难实现。

答：两者在细胞培养上的区别：tumor spheroid 不能传代培养。

两者在细胞结构的区别：tumor organoid 具备tumor的结构，而tumor spheroid 只是个细胞聚集在一起的团块。

两者在功能上的区别：tumor organoid 内部没有stroma细胞和免疫细胞，而tumor spheroid 是原代的肿瘤细胞培养得来的，含有部分前面提到的两种细胞。

答：不能。

答：肿瘤的药敏性检测是精准医疗的一种，把肿瘤病人的肿瘤组织培养成Organoid，然后检测适合使用哪种药物治疗。这个是Organoid的一个经典应用。在目前报道的文章中，没有使用基质胶。

答：CRISPR可以用于类器官的基因编辑，效率很高。

答：对于其他类型细胞比如肿瘤Organoid 中有正常组织的Organoid, 需要使用特定类型的inhibitor 来抑制正常组织的organoid的生长。

对于细菌和微生物的感染，在细胞操作的过程中注意无菌操作，在培养基中加入了用于原代细胞培养的抗生素Promicine 可以有效抑制细菌及微生物的繁殖。

答：可以从形态上区分。正常的Organoid 形态比较规则，一般是空心的，而肿瘤的类器官一般是实心的。