第三期线栓MCAO造模技术答疑（文末有惊喜）

答：1）TTC试剂过期无效；

2）TTC操作时不规范，没有在室温下避光染色，染色时间过短，没有用盖玻片压；

3）小鼠的代偿功能较强，没有明显的缺氧缺血；

4）在行为学上出现脑梗死，不代表模型成功，归因于操作不规范，没有使用多普勒血流仪器实时监测或者激光散斑检查。

答：MCAO造模后一般出现对侧肢体异常，因为一侧大脑控制身体对侧的行为活动。

MCAO造模后的行为学评估有两种：

1）Zea Longa法  Zea Longa法为5级0～4分制：0分，无神经损伤；1分，提尾时对侧前肢内收屈曲(轻度神经损伤)；2分，爬行时向对侧旋转(中度神经损伤)；3分，站立或爬行时，向对侧倾倒(重度神经损伤)；4分，无自主活动伴意识障碍。

2）改良的Garcia JH评分  该方法从大鼠自主运动、体态对称性、前肢伸展功能、攀爬运动、身体双侧触觉、双侧胡须碰触反应等6个方面评估大鼠神经功能损伤的程度。分值为3～18分，数值越大，神经功能损伤越轻，18分为正常(如下表)。

答：麻醉对造模的影响：

1）麻醉能够使得小鼠丧失运动功能，无疼痛反应，有利于术者的操作。

2）麻醉后的小鼠丧失吞咽功能，气管容易淤积痰液，造成小鼠呼吸不畅，严重的会引起窒息。咯痰的小鼠黏膜发白，呼吸微弱。术者可以使用软吸管定时帮助小鼠吸出痰液，避免该情况的发生。

3）麻醉后的小鼠体温会降低，术者可以使用加热垫维持小鼠的体温在37度左右。

目前最常规的麻醉方法是异氟烷气体麻醉，诱导麻醉的浓度为3-4%，维持麻醉的浓度为1.5-2.5%。

答：线栓进入深度与小鼠体重和年龄相关。

深度判断：用激光散斑，激光多普勒血流仪，如果是血流下降，下降到20%左右，那就进去到正确位置，如果血流不下来，就不在正确位置。一般小鼠线栓深度为9.5-10.5mm，实际操作时结扎线较松弛，轻轻地一点点往里插栓线，发现栓线被插进去又被弹出来一点点时提示终点，往往把弹出来的一点点再插进去或者插到插不动时才把线扎紧。

答：纯的肝素10mg能抗凝65-125 ml血液（按1mg等于125单位 , 10 -20单位能抗1ml血液）。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0.1毫升于试管内， 100 ℃ 烘干，每管能抗凝5-10ml血液。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2.5-3.0mg / 200-300g体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。