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技术资料/正文
技术干货 | 如何切出理想的石蜡切片？
412 人阅读发布时间：2020-12-03 17:16
石蜡切片是组织学常规制片技术中应用最为广泛的方法。但在石蜡切片过程中，经常会遇到一些问题：修整蜡块总修不平整？切片时容易碎片、翻卷？摊片时总是铺不平整？今天和大家分享如何切出符合需求的石蜡切片！
01正确固定
02恰当脱水
脱水的关键是使低浓度的酒精脱水时间和高浓度酒精脱水时间正确搭配。低浓度酒精可以使组织收缩减少，更好切；高浓度酒精使组织脱水更彻底。
一般情况下，标本脱水时间（35℃）为：75%酒精1.5小时、85%酒精2小时、95%酒精（2次）各1.5至2小时、纯酒精（2次）各1.5至2小时。小标本脱水时间与大标本差异不大，一般没必要分开（小标本发脆往往是纸包太厚或相互粘在一起，组织脱水不彻底引起的。如果时间紧急，也可适当缩短脱水时间，脱水时间长短，与室温高低密切相关，同时也与组织的厚薄、组织类型、组织固定的程度等条件有关）。
脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明。如果脱水时加温过高（超过50℃），或使用丙酮等，容易导致组织收缩过度和组织发硬发脆。组织脱水引起的组织发脆有三种原因：
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01正确固定
- 组织离体后，必须在1小时内固定。
- 固定液须是组织体积的4-10倍，浓度准确，过稀或过浓都会影响组织形态和固定效果。如发现固定液变质，如甲醛液体产生白色沉淀，应立即更换。
- 固定温度宜室温或放于35-37℃的全封闭组织处理机内，温度过高，会加快组织自溶和过度收缩，破坏细胞内的抗原和DNA。
- 固定时间不超过40小时，根据室温和标本不同而调整。
02恰当脱水
脱水的关键是使低浓度的酒精脱水时间和高浓度酒精脱水时间正确搭配。低浓度酒精可以使组织收缩减少，更好切；高浓度酒精使组织脱水更彻底。
一般情况下，标本脱水时间（35℃）为：75%酒精1.5小时、85%酒精2小时、95%酒精（2次）各1.5至2小时、纯酒精（2次）各1.5至2小时。小标本脱水时间与大标本差异不大，一般没必要分开（小标本发脆往往是纸包太厚或相互粘在一起，组织脱水不彻底引起的。如果时间紧急，也可适当缩短脱水时间，脱水时间长短，与室温高低密切相关，同时也与组织的厚薄、组织类型、组织固定的程度等条件有关）。
脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明。如果脱水时加温过高（超过50℃），或使用丙酮等，容易导致组织收缩过度和组织发硬发脆。组织脱水引起的组织发脆有三种原因：
- 组织固定不佳，酒精起到固定作用，从而引起组织质地发生改变。
- 组织本身质地因素，如小动物肝脏，在切片时温度过低导致。
- 假脆，由于脱水不足，组织在浸蜡时，蜡无法渗透到组织中去，组织在高温下“干烤”导致发硬发脆，切片会出现粉粉的或一丝丝的现象，子宫肌瘤等较硬的组织还会有一棱棱的现象，甚至会整块往外崩；严重脱水不足的组织中间发软，甚至还会有水。
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